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本试剂盒是根据TdT末端转移酶能够在DNA片段的3'端添加dNTP尾巴的原理而设计。标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

• 快速，15分钟即可完成标记反应。
  
• 不但可标记单链DNA和DNA Oligo，还可用于标记3'突出的双链DNA，只是标记效率稍低。
  
• 可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高辛标记的核苷酸等)。

• 在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μL体系的标记反应：
  

  成分	用量
  探针DNA	100～200pmol
  TdT生物素标记缓冲液(含Biotin-11-dUTP)	6μL
  TdT末端转移酶(10U/μL)	2μL
  超纯水	至20μL

  • 如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度
    
  • TdT生物素标记缓冲液中标记核苷酸和非标记的核苷酸的比例已经优化，故用户无需额外加入非标记的核苷酸。
• 37℃反应30分钟。每条探针上平均可加上约100个核苷酸，约含5个标记核苷酸。
  
• 70℃加热10分钟灭活TdT酶。
  
• 如果需要，可以PAGE电泳+银染检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没有标记的探针。
  
• 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
  
• 使用时需将探针以1～8ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。